|
|
|
|||||
|
|
||||
|
|||||
|
||
|
原癌基因c-erbB-1和c-erbB-2在人脑胶质瘤中的表达
|
||
|
作者：佚名 神经胶质瘤来源：本站原创 点击数： 更新时间：2006-8-19
|
||
关键词：原癌基因 c-erbB-1 c-erbB-2 神经胶质瘤 基因表达 0 引言 原癌基因c-erbB-1编码表皮生长因子受体(EGFR), EGFR是一分子质量为170 ku的跨膜糖蛋白;c-erbB-2 (HER-2/neu)编码另一分子质量为185 ku的跨膜糖蛋白P185. EGFR和P185有50%的同源性,二者同属Ⅰ型酪氨酸激酶受体家族,具有强大的促有丝分裂和细胞增殖作用［1,2］. 有资料显示c-erbB-1和c-erbB-2蛋白的高表达与人多种肿瘤的恶性生物学行为关系密切. 在人脑胶质瘤中,有关二者共表达的研究报道较少，且意见分歧很大［3～6］. 我们采用免疫组化方法分别检测c-erbB-1和c-erbB-2在人脑胶质瘤中的表达，以探讨二者与人脑胶质瘤发生发展的关系. 1 材料和方法 1.1 组织标本 52例人脑胶质瘤及8例正常人脑组织标本均选自西京医院病理科1990-1996年存档的石蜡包埋组织. 脑胶质瘤按1990年WHO脑肿瘤分类及分级标准，经病理组织学检查确诊，其中Ⅰ级12例，包括原纤维型星形细胞瘤5例，毛细胞型星形细胞瘤4例，室管膜瘤3例；Ⅱ级16例，包括原浆型星形细胞瘤9例，原纤维型星形细胞瘤7例；Ⅲ级11例，包括间变型星形细胞瘤8例，间变型室管膜瘤3例，Ⅳ级13例，包括多形性胶质母细胞瘤10例，髓母细胞瘤3例. 标本均经100 mL/L福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚4 μm，贴于涂有APES防脱片胶的载玻片，烤片后备用. 1.2 细胞系 2株人脑胶质瘤细胞系为国内所建，包括星形细胞瘤细胞系SHG44及多形性胶质母细胞瘤细胞系BT325. 细胞爬片于含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养基中，在37 ℃、饱和湿度及50 mL/L CO2条件下培养，待细胞接近长满盖玻片时取出，用PBS洗涤，丙酮固定后备用. 1.3 主要试剂 小鼠抗人c-erbB-1单抗和小鼠抗人c-erbB-2单抗均为Santa Cruz公司产品，c-erbB-1单抗由本校基础部免疫学教研室金伯泉教授惠赠,SABC试剂盒购自武汉博士德公司，二氨基联苯胺(DAB)为Sigma公司产品. 1.4 免疫组化SABC法 石蜡切片常规脱蜡至水，浸泡于10 mmol/L枸橼酸缓冲液（pH 6.0）中,置微波炉内加热(300 W)，煮沸10 min以修复抗原. 细胞爬片于-20 ℃及室温反复冻融3次，以增加膜通透性. 以下步骤按说明书进行,用DAB显色,苏木素复染. 分别用PBS和正常羊血清代替一抗，作为空白对照和替代对照；以c-erbB-1和c-erbB-2蛋白表达阳性的乳腺癌组织作为阳性对照. 1.5 结果判断 c-erbB-1和c-erbB-2蛋白免疫组化阳性均为胞浆和（或）胞膜呈棕黄色显色. 根据Agosti等和Schwechheimer等［3,5］的方法,每张切片随机选择10个高倍视野，记数500～1 000个细胞. 染色结果综合阳性细胞数量及染色反应强度两个方面，进行半定量处理，分别记作0～3分. 阳性细胞数＜35%为1分，35%～70%为2分，＞70%为3分；染色反应强度以多数细胞为准. 根据两项指标的积分数分为四级：0分为-，2分为+，3～4分为，5～6分为. 1.6 统计学分析 采用χ2检验，Ridit分析. 2 结果 2.1 c-erbB-1蛋白免疫组化结果 c-erbB-1阳性物质定位于胞浆和胞膜，以胞浆为强，呈棕黄色细颗粒样，阳性细胞呈散在,局灶或弥漫状分布(Fig 1，2). 脑胶质瘤c-erbB-1蛋白总阳性率为73.1%，2株人脑胶质瘤细胞系全部阳性，8例正常人脑组织均为阴性；c-erbB-1蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为50.0%,68.8%,81.8%和92.3%,低恶性度（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤(60.7%)和高恶性度（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤(87.5%)间阳性率差异显著（P＜0.05）,Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤相邻级别间阳性率无显著差别（P＞0.05);Ridit分析，c-erbB-1表达强度在高恶性度和低恶性度胶质瘤间差异极显著（P＜0.01)，Ⅰ～Ⅱ级及Ⅱ～Ⅲ级间差异亦显著（P＜0.05，Tab 1）. 2.2 c-erbB-2蛋白免疫组化结果 c-erbB-2阳性物质定位和分布与c-erbB-1基本一致(Fig 3, 4). 脑胶质瘤c-erbB-2蛋白总阳性率为86.5%，2株人脑胶质瘤细胞系全部阳性，8例正常人脑组织均为阴性；c-erbB-2蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为75.0%, 87.5%, 90.9%和92.3%, 低恶性度胶质瘤(82.1%)和高恶性度胶质瘤(91.7%)间以及Ⅰ～Ⅳ胶质瘤各级间阳性率均无显著性差别（P＞0.05)；Ridit分析，c-erbB-2表达强度在高恶性度和低恶性度胶质瘤间差异极显著（P＜0. 01)，且Ⅰ～Ⅱ级及Ⅱ～Ⅲ级间差异亦显著（P＜0.05，Tab 1）. 表1 原癌基因c-erbB-1和c-erbB-2在正常脑组织,胶质瘤及胶质瘤细胞系中的表达 tab 1 Expression of proto-oncogenes c-erbB-1 and c-erbB-2 in normal brain tissues, gliomas, and glioma cell lines
NB：normal brain tissue, G：glioma, GCL：glioma cell line, PI：positive rate 2.3 c-erbB-1和c-erbB-2免疫组化结果综合分析 二者均表达者35例,均阴性者4例,c-erbB-1表达而c-erbB-2阴性者3例,c-erbB-2表达而c-erbB-1阴性者10例,二者表达水平密切相关（P＜0.05).
图1 原纤维型星形细胞瘤(Ⅱ级)c-erbB-1蛋白染色 fig 1 c-erbB-1 protein staining in fibrillary astrocytoma (grade Ⅱ) DAB as chromogen, hematoxylin counterstain, the positive cells show brown-yellow staining in their cell cytoplasms and membranes, SABC method ×400
图2 多形性胶质母细胞瘤(Ⅳ级)c-erbB-1蛋白染色 fig 2 c-erbB-1 protein staining in glioblastoma multiforme (grade Ⅳ) DAB as chromogen, hematoxylin counterstain, the positive cells show brown-yellow staining in their cell cytoplasms and membranes, SABC method ×400
图3 原浆型星形细胞瘤(Ⅱ级)c-erbB-2蛋白染色 fig 3 c-erbB-2 protein staining in protoplasmic astrocytoma (grade Ⅱ) DAB as chromogen, hematoxylin counterstain, the positive cells show brown-yellow staining in their cell cytoplasms and membranes, SABC method ×400
图4 多形性胶质母细胞瘤(Ⅳ级)c-erbB-2蛋白染色 fig 4 c-erbB-2 protein staining in glioblastoma multiforme (grade Ⅳ) DAB as chromogen, hematoxylin counterstain, the positive cells show brown-yellow staining in their cell cytoplasms and membranes, SABC method ×400 3 讨论 本实验免疫组化结果显示，c-erbB-1在人脑胶质瘤及体外细胞系中普遍表达，且表达阳性率及表达强度均随胶质瘤恶性程度增加而增强. 提示c-erbB-1与胶质瘤恶性生物学潜能关系密切，胶质瘤细胞可能通过EGFR及其配体EGF和TGF α等构成的自分泌或旁分泌生长环路，促进其自身的恶性失控性增长［1］. Agosti等［3］对103例脑胶质瘤免疫组化检测，发现EGFR在37%的恶性（Ⅳ级）胶质瘤存在过表达，而在低恶性（Ⅰ～Ⅲ级）胶质瘤无表达. 刘旭文等［4］的结果显示，在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中EGFR阳性率分别为16.7%,40.0%,63.6%和72.2%. 本实验EGFR阳性率在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤分别为50.0%,68.8%,81.8%及92.3%，阳性率高于前两组结果. 这可能与所用EGFR抗体及免疫组化方法不同，检测灵敏性各异以及标本选择存在差异有关. 实验表明，胶质瘤细胞除表达正常EGFR外，c-erbB-1基因的重排和突变还导致截尾型EGFR的产生，该型受体无需与相应配体结合，即可持续被激活，并向核内传递有丝分裂信号［1,3］. Moscatello等［7］用一种突变型EGFR特异性抗体检测66例脑胶质瘤，发现在成人（60%）及儿童（77%）均有高表达. 由于本实验，包括其它诸多有关实验研究，均采用单一的正常EGFR抗体检测，可能尚不足以充分反应c-erbB-1的表达水平，设想联合应用多种抗体，包括针对正常EGFR及各种突变型EGFR的抗体，更能客观反应c-erbB-1的表达状况，这有待进一步研究证实. 本实验中c-erbB-2在人脑胶质瘤及体外细胞系也广泛表达，虽其表达阳性率随胶质瘤恶性程度增高增加不明显,但其表达强度随胶质瘤恶性程度增加而显著增强. 提示c-erbB-2与胶质瘤恶性生物学行为亦密切相关，胶质瘤细胞可能通过c-erbB-2及其配体如胶质生长因子等构成自分泌或旁分泌生长环路，促进其自身的恶性失控性增殖［1,5］. 本组52例脑胶质瘤c-erbB-2蛋白总阳性率为86.5%,与Schwechheimer等［5］报道的81.6%和卞修武等［6］报道的91.1%的结果接近,Schwechheimer等［5］的结果也显示c-erbB-2表达随胶质瘤恶性程度增高而增强，与本实验结果一致. 而卞修武等［6］认为c-erbB-2表达与胶质瘤恶性程度成负相关，即胶质瘤分化高者c-erbB-2表达强于分化低者. 这一截然相反的结果似乎已不能单纯用实验方法及选用标本造成的差异来解释，其原因有待于进一步探讨. 分析表明，c-erbB-1和c-erbB-2二者表达密切相关,但c-erbB-2表达阳性率及表达强度均较c-erbB-1为强. 提示,虽然二者在胶质瘤恶性发展的整个过程中均发挥重要作用,但c-erbB-2与c-erbB-1相比,其异常表达可能是更为早期的事件,而c-erbB-1可能在胶质瘤发展的晚期作用更为显著. 鉴于c-erbB-1和c-erbB-2基因共表达与? 越褐柿龆裥陨镅匦缘拿芮泄叵担柘胍詂-erbB-1和c-erbB-2基因为靶点，通过免疫及基因治疗方法阻断和封闭其致癌活性，将有助于脑胶质瘤的治疗，这有待于进一步深入研究. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|
Copyright © 2006-2007 All Rights Reserved 版权所有：www.cncancer.com.cn
中国癌症治疗信息网 |
相关资讯